动物细胞培养时需要在培养液中加入动物血清.为了研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响,科研人员做了以
动物细胞培养时需要在培养液中加入动物血清.为了研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响,科研人员做了以下实验:
将分离出的牛血清装入专用血清瓶后放入冰箱中直立静置一段时间.取三根刻度吸管,将血清从上到下轻轻吸成均等的三份,分别装入消毒后的瓶中,标记为上、中、下,再分别从三个瓶中吸取等量的血清置于另一小瓶中,混合均匀备用.分别取等量的不同“层次“的血清和混合血清加入到新配制的动物细胞培养液中,再接种小鼠上皮细胞(接种细胞密度为5×104个/mL),在适宜条件下培养72h后,进行计数.结果如表:
组别 | 上 | 中 | 下 | 混 |
72h 细胞数/个?mL-1 | 9.75×104 | 1.04×105 | 7.5×104 | 1.85×105 |
请回答:
(1)吸取血清过程中,要严格禁止震动和摇晃,目的是______.
(2)细胞培养过程中,二氧化碳的主要作用是______,每天更换培养基的目的是______.
(3)如果用血细胞计数板计数细胞时进行如图所示的操作,统计出来的数据比实际值偏______,正确的操作应该是______.
(4)从表中结果可以看出,不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同.造成这种结果的主要原因是不同“层次“血清中______.
(5)根据实验结果,在动物细胞培养过程中,正确使用血清的方法是______.分析:分析表格:表中为上、中、下三层血清及混合血清中细胞增殖情况,不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同,且均比混合血清中自爆增殖速度慢,因此在动物细胞培养过程中,正确使用血清的方法是将血清充分混匀后再加人到培养液中.
解答:
(1)本实验的目的是研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响,因此吸取血清过程中,要严格禁止震动和摇晃,防止不同层次血清混合.
(2)动物细胞培养需要一定的气体环境,即95%氧气+5%二氧化碳,其中二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH;每天更换培养基可以补充营养物质,并能去除代谢废物,这样有利于细胞增殖.
(3)如果用血细胞计数板计数细胞时,应该先盖上盖玻片,后滴加细胞悬液,若先滴加细胞悬液,后盖上盖玻片,则统计出来的数据比实际值偏大.
(4)由表可知,不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同,且均比混合血清中自爆增殖速度慢,原因主要是不同“层次“血清中营养成分不全.
(5)由表可知混合血清中细胞增殖速率最快,因此在动物细胞培养过程中,正确使用血清的方法是将血清充分混匀后再加人到培养液中.
故答案为:
(1)防止不同层次血清混合
(2)维持培养液的pH 补充营养物质和去除代谢废物,有利于细胞增殖
(3)大 先盖上盖玻片,后滴细胞悬液
(4)营养成分不全(或营养成分不同)
(5)将血清充分混匀后再加人到培养液中
(1)本实验的目的是研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响,因此吸取血清过程中,要严格禁止震动和摇晃,防止不同层次血清混合.
(2)动物细胞培养需要一定的气体环境,即95%氧气+5%二氧化碳,其中二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH;每天更换培养基可以补充营养物质,并能去除代谢废物,这样有利于细胞增殖.
(3)如果用血细胞计数板计数细胞时,应该先盖上盖玻片,后滴加细胞悬液,若先滴加细胞悬液,后盖上盖玻片,则统计出来的数据比实际值偏大.
(4)由表可知,不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同,且均比混合血清中自爆增殖速度慢,原因主要是不同“层次“血清中营养成分不全.
(5)由表可知混合血清中细胞增殖速率最快,因此在动物细胞培养过程中,正确使用血清的方法是将血清充分混匀后再加人到培养液中.
故答案为:
(1)防止不同层次血清混合
(2)维持培养液的pH 补充营养物质和去除代谢废物,有利于细胞增殖
(3)大 先盖上盖玻片,后滴细胞悬液
(4)营养成分不全(或营养成分不同)
(5)将血清充分混匀后再加人到培养液中
因为血清中有很多生长因子是我们人工无法合成或还没有明确的成分,这些成分我们无法合成或合成代价昂贵.因此选用血清.
为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清
牛血清是重要的细胞培养添加成分,但目前牛血清的类型有胎牛血清、新生牛血清、补铁新生牛血清等,其性能和价格均不相同。
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5.起酸碱度缓冲液作用。
6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
胎牛血清培养效果通常来说是最佳。而补铁新生牛血清对于一些细胞类型,其效果可等价于胎牛血清,或优于常规新生牛血清。
三种血清价格从高到低排序为:
胎牛血清、补铁新生牛血清、常规新生牛血清。最适血清的选择,与各实验室、生产企业的条件和需求有关,与所培养细胞类型有关。除了根据以往经验和文献报道,必要时也可开展针对特定细胞的血清筛选试验,以筛选出最佳血清。
不同类型血清比较的最新报道:
2021年8月《生物学杂志》第4期刊登了一篇《不同类型牛血清对MDCK 细胞培养效果研究》,研究了进口胎牛血清、国产胎牛血清、国产新生牛血清对MDCK 细胞的促生长效果。
作者在含10%不同类型牛血清的DMEM培养液中连续传代培养MDCK细胞,比较了三种血清培养MDCK细胞的传代稳定性、最大増殖密度、倍增时间、比生长速率、贴壁率等指标。
结果显示,在最大增殖密度和倍增时间上,胎牛血清均优于新生牛血清。在贴壁率方面[贴壁率(%) = (所形成集落数/ 接种细胞数)×100%],进口胎牛血清略高于国产胎牛血清,差异显著;国产新生牛血清低于国产胎牛血清和进口胎牛血清,差异极显著。
Ausbian是市面上一款比较低调、却口碑相传、被反复选择的进口血清品牌,它被各大科研院所、高校重点实验室及药厂广泛使用,并多年来持续稳定供应细胞典藏等重大项目。
下面对Ausbian®血清做一个简单介绍。
一、Ausbian®进口牛血清,包括:
Ausbian®特级胎牛血清、
Ausbian®精制新生牛血清、
Ausbian®补铁新生牛血清、
Ausbian®疫苗专用新生牛血清、
Ausbian®细胞治疗专用胎牛血清、
Ausbian®透析胎牛血清。
二、Ausbian®血清质控
所有Ausbian®血清出厂前,均经过严格质控,
每个批次附有详细完整的《检测报告》,
包括:品名、货号、批号、血源地、生产日期、保质期、pH值、渗透压、总蛋白、无菌检查(细菌、真菌、支原体)、病毒检查(如BVD、牛腺病毒、细胞病变效应等)以及促细胞生长能力等。
三、Ausbian®血清的优势如下:
均精选内毒素更低批次(≤3EU/ml),使细胞更健康。Ausbian®特级胎牛血清尤其可满足干细胞、基因敲除、原代培养、细胞典藏、长期传代等各类细胞的培养要求;是细胞典藏等重大项目十几年的稳定供应品牌。
新批次在使用前,提供试用服务,养细胞更放心。
胎牛血清每批次产量为1500瓶-2500瓶,新生牛血清每批次产量为2000瓶-3000瓶。试用满意的实验室批号优先锁定,保证大多数项目两年不需换批次,细胞试验数据稳定。
每年按厂家生产顺序,会有多批次平行供应,每个实验室专属批号管理,保证供货稳定。
为Ausbian®血清用户免费提供申报支持,具有完整的检测报告,为各类项目的申报提供支持。(同时为血清VIP用户在支原体检测、方法学验证等方面,提供更多免费延伸性技术帮助。)
针对特殊科研项目,可提供3-5个平行批次,让试验人有更多选择空间。
为Ausbian®血清提供免费代储存服务,为储存空间不足的实验室提供可靠的血清仓储保护,按要求随时发货。
Ausbian®血清从出厂,到实验室,全程低温冷链保护,确保血清无反复冻融。
免费真品保障,每个血清瓶身加贴Viansaga®防伪标签,Ausbian品牌真品保护,逢假必究,为实验室做好售后保障。
免费无忧售后,所有实验室签收的Ausbian胎牛血清,从签收日开始计算,一年之内,血清在妥善保管、未开封未融化、且不影响二次销售的情况下,均可享受无条件退货或换货的售后保障。
免费专业帮助,汇集近二十年,千万个血清用户细胞培养经验,为各种细胞培养提供问题梳理分析,解决方案参考。
对于生产或研究所用的培养细胞,大多数情况下,生产或研究人员可以依据以往经验以及文献报道选择合适的血清。
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添加了血清就相当于给动物细胞提供了一个与原体内环境类似的培养环境,含血清的培养基能够提供丰富的营养组分,有促生长效果。所以对动物细胞进行培养时通常要添加血清
但是如果培养细胞的目的是为了分泌表达蛋白,那么无血清培养会更加有利。尤其是生产一些可能用于人体的细胞因子的时候,无动物血清来源的培养基对于保证产品质量安全更加有利。
细胞培养中血清为什么不是越多越好
细胞培养中血清为什么不是越多越好
天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等.组织培养技术建立早期,体外培养细胞都是利用天然培养基.但是由于天然培养基制作过程复杂,因此逐渐为合成培养基所替代.目前广泛使用的天然培养基是血清,另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少.
血清细胞培养的发展,培养基的质量又是关键,而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用.在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的,所以血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一.保证血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节.1.血清种类
目前用于组织培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等.选择用牛血清培养细胞的原因:来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解.牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适.
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能.牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清.胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛.显然,胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少.2.血清的主要成分
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异.血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的.对血清的成分和作用的研究虽有很大进展,但仍存在一些问题.主要是:第一:血清的成份可能有几百种之多,目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难.第二:血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制.第三:不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化”的原因之一.3.血清主要作用
提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质.
提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素(氢化可的松、地塞米松)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等.生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等.
提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁.结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用.
提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤.
对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用.这种作用是偶然发现的,现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用.因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代.血清蛋白形成了血清的粘度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用.血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用,如SeO3,
硒等.4.细胞培养中使用血清的缺点
血清成分复杂,虽含许多对细胞有利成分,也含有对细胞有害的成分,使血清有几个明显的缺点:
对大多数细胞,在体内状态,血清不是它们接触的生理学液体,只是在损伤愈合
为什么动物细胞的培养要加入血清?
天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期,体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂,因此逐渐为合成培养基所替代。目前广泛使用的天然培养基是血清,另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。
血清细胞培养的发展,培养基的质量又是关键,而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的,所以血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。保证血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。1.血清种类
目前用于组织培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。选择用牛血清培养细胞的原因:来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然,胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。2.血清的主要成分
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展,但仍存在一些问题。主要是:第一:血清的成份可能有几百种之多,目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难。第二:血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制。第三:不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。3.血清主要作用
提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。
提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素(氢化可的松、地塞米松)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。
对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。这种作用是偶然发现的,现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用,如SeO3,
硒等。4.细胞培养中使用血清的缺点
血清成分复杂,虽含许多对细胞有利成分,也含有对细胞有害的成分,使血清有几个明显的缺点:
对大多数细胞,在体内状态,血清不是它们接触的生理学液体,只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清,因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态,血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。
血清含一些对细胞产生毒性的物质,如多胺氧化酶,能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长,甚至造成细胞死亡。
动物个体不同,血清产地、批号不同,每批质量差异甚大,其成分不能保持一致。
取材中可能带入支原体、病毒,对细胞产生潜在影响,可能导致实验失败或实验结果不可靠性。
血清的使用使得实验和生产的标准化困难,其中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成。
大规模生产中,血清来源越来越困难,价格昂贵,是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。
文章标题: 靠喝细胞培养用的牛血清可以维持人的生命、满足营养需求吗
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