植物组织培养时怎样保证无菌

如何对植物组培光照培养箱进行灭菌
一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤：
（1）准备阶段
查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。
（2）外植体选择与消毒
选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，接种到初代培养基上。
（3）初代培养
接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。
（4）继代培养
分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经多次切割转接。当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。
（5）生根培养
刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，提高生长素浓度，促进小苗生根，提高其健壮度。
（6）炼苗移栽

选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。
如：茎尖→表面消毒→接种诱导培养基→茎尖生长→病毒检测鉴定→培养无根小植株→培养生根→完整小植株→炼苗20-25天→移栽成活。

硬件条件：
1、操作环境要干净无菌，如在组培室紫外杀菌、超净工作台里操作
2、组培用品如组培瓶、培养皿、等要经过高压蒸汽灭菌，镊子、刀具要酒精灯烧过再用。
操作过程也要尽量保持无菌操作包括双手消毒、材料消毒、尽量酒精灯旁操作、培养瓶要用封口膜封好再拿出超净台等等。如果是有抗生素抗性的转基因材料，在培养基中加上抗生素也是很好的控菌措施。

材料灭菌 外植体除了茎尖和根部其他基本都会带有细菌或病毒 一般先用酒精擦洗外植体外表面 再用无菌水冲洗 再用次氯酸钠浸泡 再用无菌水冲洗5次左右 再用无菌水浸泡半个小时 取出后是无菌状态的 但以上的操作必须是无菌操作

番木瓜组织培养无菌体系的建立 番木瓜株性复杂、遗传高度杂合,用常规种子繁殖很难保持株性一致,同时,番木瓜环斑病毒病使其由多年生变为一年生,大大限制了番木瓜的生产和利用。通过组织培养进行无性系快速繁殖可以解决,在种苗商业化生产中已进入应用阶段。1材料与方法1.1外植体的选择、获取与预处理从田间成年健壮番木瓜植株上剪取生长有顶芽和侧芽的旺盛分枝,切除多余枝条部分,去掉叶片、叶柄,放入保鲜袋。1.2外植体的消毒方法的确定1.2.1方法Ⅰ自来水冲洗10min→饱和肥皂水浸泡20min→无菌水冲洗3次→75%酒精30s→无菌水冲洗2次→4%次氯酸钠12min→无菌水冲洗4次→消毒的滤纸上吸干水分→接种到不含山农一号溶液的培养基中。1.2.2方法Ⅱ自来水冲洗10min→饱和肥皂水20min→无菌水冲洗3次→75%酒精30s→无菌水冲洗2次→0.1%升汞10min→4%次氯酸钠8min→无菌水冲洗4次→消毒的滤纸上吸干水分→接种到不含山农一号溶液的培养基中。1.2.3方法Ⅲ自来水冲洗10min→饱和肥皂水20min→无菌水冲洗3次→75%酒精30s→无菌水冲洗2次→0.1%升汞10min→无菌水冲洗.....
濮云飞