如何从植物固体培养基中完好地取出植物的根
时间: 2023-01-17 23:01:04 | 来源: 喜蛋文章网 | 编辑: admin | 阅读: 99次
植物组织培养怎样进行技术操作？
1.玻璃器皿的洗涤：
各种玻璃器皿均应先用洗衣粉洗净后，清水冲洗干净，放入洗液中浸24小时后用清洁水冲洗干净，再经蒸馏水冲洗一次，然后放入烘箱中烘干备用。
洗液的配制：一般采用重铬酸钾50克，加入蒸馏水10毫升，加温溶化，冷却后再缓缓注入90毫升工业硫酸。
2.培养基的制备：
（1）培养基的组成：主要成分包括各种无机盐（大量元素和微量元素）、有机化合物（蔗糖、维生素类、氨基酸、核酸或其他水解物等）、螯合剂（EDTA）和植物激素。固体培养基还应加入琼脂使培养基固化。
经常使用的培养基，可先将各种药品配成10倍或100倍的母液，放入冰箱中保存，用时再按比例取用。
①大量元素：将药品称取之后，分别溶解再依顺序混合定溶，配成10倍浓度的母液，每配制1毫升培养基时取母液100毫升。
②微量元素：微量元素用量少，为精确、方便称取，常配成100倍或1000倍的母液。每配制1毫升培养基时取母液10毫升或1毫升。
③有机化合物类，同微量元素一样，可配成100倍或1000倍的母液，使用时每1毫升培养基中取用10毫升或1毫升。
④铁盐（螯合剂）：铁盐是单独配制的，由硫酸亚铁5.57克和乙二铵四乙酸二钠7.45克，溶于1毫升水中配成，每配制1毫升培养基取用5毫升。
⑤植物激素：一般将植物激素配制成0.1～0.5毫克/毫升的溶液。由于植物激素多数难溶于水，可采用以下方法：
萘乙酸（NAA）：可溶于热水中或先溶于少量95%酒精中，再加水至一定浓度。
吲哚丁酸（IBA）：先用少量0.4%的NaOH溶液溶解，再加水到一定浓度。
吲哚乙酸（IAA）：先溶于少量95%酒精中，再加水到一定浓度。
2，4-D先用少量3.65%的HCl溶液溶解，再加水到一定浓度。
细胞分裂素：6-苄基嘌呤（6-BA）、激动素（KJ）需用3.65%的HCl或0.4%NaOH溶液先溶解后，再加水到一定浓度。
以上所配制的各种母液或单独配制的各种药液，均应放入2～4℃冰箱中保存，以防变质或微生物的污染。培养基中的蔗糖和琼脂，可依需要量随用随称取。
（2）培养基的配方：植物组织培养成功与否，在一定程度上决定于培养基的选择。不同培养基由于所含无机盐的量不同，其实验材料的反应也有差异。植物组织培养常用的培养基为MS培养基。铁盐的使用，除允许培养基用柠檬酸铁10毫克/毫升外，其余培养基都用铁盐母液5毫克/毫升。
表6-13常用培养基营养成分（单位：毫克/千克）
常用培养基营养成分（单位：毫克/千克）（续）-1
（3）培养基的制备程序：配置培养基时，首先按需要量依次吸取各种药液，混合在一起。将蔗糖放入溶化的琼脂中溶解，然后注入混合液，搅拌均匀后用0.4%的NaOH或3.65%的HCl溶液调节pH，再分装于三角瓶等培养容器内，用锡薄纸、羊皮纸等将容器口封紧包好。最后将分装后的培养基，放入高压灭菌锅中灭菌，一般采用1.1千克/厘米压力消毒灭菌15～20分钟，取出冷却凝固后备用。不同培养基在灭菌前应做好标记，防止混乱。
培养基的制作程度
3.接种：
常用消毒剂效果比较
为了得到无菌材料，在接种前必须先对植物材料进行消毒。一般采用化学试剂进行表面消毒。试剂选择及处理时间的长短，依植物材料对试剂的敏感性来决定，并且要选用消毒后容易除去的药剂，防止产生药害，影响愈合组织的发生。常用的消毒药剂有漂白粉（次氯酸钙）、安替福民（次氯酸钠），升汞等（表6-14）。在材料放入消毒剂之前，先用自来水冲洗或先在70%酒精中漂洗一下，有利于消毒剂渗入植物材料并杀死微生物，放入消毒剂消毒后，必须用无菌水认真冲洗几次，再进行接种。由于植物种类及所选用的植物器官或植物组织不同，在消毒顺序和消毒时间上也各不同。
接种用的植物材料（外植体）的大小和形状没有严格限制，但不能太小，过小细胞分裂难以发生。因此，一般要求切块的大小要适当。接种的全过程都应在无菌条件下进行。目前都是在超净工作台上完成，将植物材料接入培养基中即可。
4.培养：
植物组织培养和栽培植物一样，也受温度、光照、培养基的pH等各种环境条件的影响，培养中应严格控制培养室的条件。由于植物的种类，所取植物材料部位等的不同，所要求的环境条件也有差异。一般培养室保持在25±2℃的恒温条件，低于15℃培养物的生长停滞，高于35℃时对生长不利；光照强度为2000勒克斯，光照时间为10～12小时；对培养室内的湿度，一般不加控制，因装有培养基的容器内的湿度基本上能满足要求，外界环境的湿度过高容易造成污染；组培中培养基的pH通常为5.5～6.5。pH在4.0以下，7.0以上对生长都不利。培养不同的植物，选用不同的培养基所要求的pH也不同。
植物组织培养能否成功，选择适合的培养基极为重要。愈合组织的生长、分化和生根，又取决于培养基中激动素和生长素的含量，过高过低都不利于生长。
组培成苗的顺序为：
5.移栽：
组培幼苗移栽成活，是获得大批组培苗的最后一个重要环节，常因移栽不当而遭到损失。通常试管苗具有3～5条根后即可移栽。但长期在瓶内无菌条件下培养的小苗，直接移到室外，必须经过一个过度阶段。移栽前可将试管苗先打开，放在与培养条件相近的光照充足处，锻炼3～5天，使其适应环境后再移栽。移栽时用清水洗去根上的琼脂再栽入盆中，栽植土可选用通气好的粗砂、蛭石、珍珠岩均可，为保持温度，可用塑料薄膜覆盖，这样在室内保持10～30天，就可移至大田正常生长。由组培苗改为盆栽苗又是组培育苗成败的关键之一，因此，应控制好温度、湿度及光照。各种植物对环境条件的要求不同，应区别对待。
简述植物组织培养的概念，并且谈谈如何从植物组织培养中获得完整的植株
组织培养的过程：在无菌的情况下，将植物体内的某一部分器官或组织，如茎尖、芽尖、形成层、根尖、胚芽和茎的髓组织等从植物体上分离下来，放在适宜培养基上培养，经过一段时间的生长、分化最后长成一个完整的植株。组织培养是加速植物繁殖、创造优良品种的一种行之有效的方法。
谁能讲讲植物组织培养的具体步骤
要详细点的，比如拿马铃薯来讲。希望是有过生产实践的朋友。谢谢了。rn如果是用培养基，用哪种培养基。取马铃薯的哪部分作培养。一、培养材料的采集
组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、睫、叶、花、芽和种子的子叶，有时也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般很少采用。
对于木本花卉来说，阔叶树可在一、二年生的枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚轴，草本植物多采集睫尖。
在快速繁殖中，最常用的培养材料是睫尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取睫尖的分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。这里使用马铃薯
二、培养材料的消毒
（一）先将材料用流水冲洗干净，最後一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。
（二）在无菌坏境中将材料放入70％洒精中浸泡30－60秒。
（三）再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01％升汞水中消毒10分钟。
（四）取出後用无菌水冲洗三、四次。
三、制备外植体
将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。然後切成0.2－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。在操作中严禁用手触动材料。
四、接种和培养
（一）接种
在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种4－10个。
（二）封口
接种後，瓶、管用无菌药棉或宾吨f，培养皿用无菌胶带封口。
（三）温度
培养基大多应保持在25℃左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。
（四）增殖
外植体的增殖是组培的关键阶段，在新梢等形成後为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1个月左右後，可视情况进行再增殖。
（五）根的诱导
继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月後即可获得键壮根系。
五、组培苗的练苗移栽
试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境，必须进行炼苗。一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然後取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98％左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。
植物组织培养材料和方法
从低等的藻类到苔藓、蕨类、种子植物等高等植物的各类、各部分都可采用作为组织培养的材料，一般裸子植物多采用幼苗、芽、韧皮部细胞，被子植物采用胚、胚乳、子叶、幼苗、茎尖、根、茎、叶、花药、花粉、子房和胚珠等各个部分。
由于植物在自然条件下，表面常被霉菌和细菌污染，故材料必须进行灭菌处理。一般用漂白粉溶液（1～10％）、次氯酸钠溶液（0．5～10％）、升汞溶液（0．01％）、乙醇（70％）或过氧化氢（3～10％）等处理后，再用无菌水反复冲洗至净，然后在无菌室内，将所取的组织迅速培养在固体培养基上。在适宜的条件下，受伤组织切口表面不久即能长出一种脱分化的组织堆块，称为愈伤组织（Callus），此种愈伤组织在适当的培养基上经一定时间即能诱导生长成整株植物，因此愈伤组织既可是某种植物代谢产物的来源，又是诱导成株的主要途径之一。
在适宜的培养条件下，还可使愈伤组织长期传代生存下去，这种培养称为继代培养。但在继代培养中，不少植物培养的组织或细胞随着再培养代数的增加，分化能力就逐渐降低甚至丧失，其原因可能是由于在培养过程中原有母体中存在的、与器官形成有关的特殊物质被逐渐消耗所致，因此可以用激素或改善营养条件使之恢复，也有认为是组织和细胞在长期培养中遗传往的改变，主要是染色体的变化，出现大量多倍性或非整倍性细胞，这种改变恢复的可能住较小。不同的培养基可以使愈伤组织具有不同的生长速度，结构也可松可紧，利用这些特性可使之分散成为单细胞或很小的细胞团。要形成单细胞培养宜在较高盐分、高生长素及高水解酪蛋白的培养基中进行，然后移入液体并经搅拌而分散成单细胞。也有用加入一些果胶酶的办法，但一般来说要得到纯一的单细胞是很少的。
在培养药用植物选材时，还应考虑到所需要的次生物质在植物体中的合成部位，如果选材和培养方法适当，可使原植物内所产主的代谢物通过细胞或组织培养发生生化转变而获得。
通过组织培养可获得有效成分，但实际上只有大量培养成功才有经济价值。因此在生产上常采用悬浮培养法来代替含有琼脂的固体培养基。愈伤组织悬浮培养的生长通常比静止培养快，这是由于悬浮培养时营养成分可较快地渗入细胞，抑制生长的代谢废物可较快地除去，同时供氧情况也较好，在进行这种培养时要注意通气与定期更新营养液，这是保证生长稳定，次生物质产量高的关键之一。
蔗糖 2g
自来水 100mL
琼脂 2g
pH 自然（约6.0）
灭菌 1.05kg/cm2，20min
马铃薯处理方法:
马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min（注意火力的控制，可适当补水） ，用纱布过滤，滤液加糖，补足水至100ml，装入三角瓶。
选用液态培养基
要经常更换培养基
注意消毒，杀菌
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