如何验证植物细胞的死活

通过质壁分离实验可以鉴定成熟植物细胞的死活，因为死细胞的原生质层已经丧失了选择透过性，而变成了全透性的了，则原生质层也不会因为失水而皱缩了，因此也就不会发生质壁分离了，A正确；
B、动物的细胞膜相当于半透膜，在低渗溶液中细胞吸水膨胀，甚至胀破；在高渗溶液中细胞失水皱缩，B正确；
C、水分子进出细胞，取决于细胞内外液体的浓度差，如果细胞外液大于细胞内的液体浓度，则细胞失水；如果细胞外液小于细胞内的液体浓度，则细胞吸水，C正确；
D、并不是所有的小分子都能透过膜的，比如Na + 等离子．也不是所有的大分子不能透过膜的，一些大分子可以通过胞吞或者胞吐等途径透过细胞膜，比如分泌性的蛋白通过胞吐作用分泌到细胞外，D错误．
故选：D．

操作难度：★★

实验方法：

下面我们介绍一种用活体染色技术鉴定植物细胞死活的方法。

本实验需要如下材料和用具：洋葱鳞茎、小麦叶片或紫鸭跖草叶片、刀片、尖头镊子、载玻片、盖玻片、显微镜、0.03％中性红溶液、1M硝酸钾溶液、酒精灯。

实验步骤如下：

1.削取较幼嫩的洋葱鳞片，在内表面切割5平方毫米左右的方形切痕，用尖镊子撕下这块内表皮，投入0.03％的中性红溶液中。如用小麦叶片，表皮不易撕取，可把叶片平放载玻片上，加水蘸湿，用刀片轻轻刮去上表皮、叶肉和叶脉，只留下一层下表皮，再切割成5平方毫米的小片。

2.染色10~15分钟后取出，用蒸馏水稍加冲洗，在低倍镜下观察，此时主要是细胞壁染色，原生质和液泡不着色。

3.将制片放在自来水（pH值略高于7.0）中浸泡10~15分钟，再进行显微观察，此时细胞壁完全脱色，液泡染成均匀的樱桃红色，细胞核和原生质不着色。

4.将染好的表皮浸入1M的硝酸钾溶液中，约10分钟后取出观察。由于钾离子能使原生质膨胀，发生帽状质壁分离，因此能清楚地看到无色透明的原生质和染为红色的液泡。

5.将表皮组织加热或酒精浸泡，杀死细胞后再染色，则可看到死细胞的细胞质及细胞核都染上颜色，而看不到活细胞具有的液泡染色现象。

如将步骤3中的活染制片在酒精灯火焰上微微加热，以杀死细胞，也可看到原生质呈不均匀的凝胶状，与细胞核一起被染成红色。

另外，在活染制片中仔细寻找，也可能看到个别死细胞，经中性红染色后其细胞核清晰可辨。

知识延伸：

活体染色是利用某种对植物无害的染料稀溶液进行活细胞染色的技术。中性红是常用的活体染料之一，它是一种碱性染料，也是一种弱碱性pH值指示剂，变色范围在pH值6.8~8.0之间（由红变黄）。在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡内排泌。由于液泡通常呈酸性反应，因此进入液泡的中性红呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色。

死细胞由于膜的选择透性消失，液泡破坏，因此不产生液泡着色现象。但中性红的阳离子却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，使原生质和细胞核染色。